PRODUÇÃO DE MASSA DE CÉLULAS PERMEABILIZADAS DE KLUYVEROMYCES LACTIS E ATIVIDADE CATALÍTICA DA β-GALACTOSIDASE NA HIDRÓLISE DE LACTOSE

Ano: 2008 | Volume: 63 | Número: 365

Palavras-chave: β-galactosidase; hidrólise de lactose; Kluyveromyces lactis

Resumo Português:

A produção de massa de célula permeabilizada de Kluyveromyces lactis contendo a enzimagalactosidase
e sua atividade catalítica na hidrólise de lactose foi realizada. Para obtenção da massa de
célula permeabilizada, células foram produzidas, crescendo em soro de leite UF estéril. Para promover
a permeabilização da membrana, células foram tratadas com uma solução etanol 50% para facilitar o
contato entre a enzima e o substrato no processo de hidrólise da lactose. A atividade catalítica da
enzima na hidrólise de lactose foi obtida pela relação linear entre a velocidade de reação e peso seco em
mg de célula permeabilizada. A massa de 1mg de células permeabilizadas equivaleu a 0,32 unidades de
atividade de enzima. O efeito da suspensão de célula permeabilizada na velocidade inicial de reação foi
estudado utilizando diferentes concentrações de lactose (1, 40, 100 e 140 mM) e suspensões de células
permeabilizadas que variaram de 0,1 a 3 mg/ml. As reações foram acompanhadas no espectofotômetro
DU em 510nm, que forneceu uma curva da variação de absorbância com o tempo de reação. A inclinação
da reta apresentada por cada curva correspondeu as velocidades iniciais para cada concentração de célula
permebilizada e de lactose. Foi utilizado nessa análise um reagente colorimétrico GOP-PAP que reagiu
especificamente com a glicose presente no meio. Para conversão da leitura de absorvância em unidades
de mM glicose, foi feita uma curva padrão de glicose. A concentração de 1mg/ml de célula permeabilizada
adicionada à mistura de reação, foi selecionada pela sua relação linear com a velocidade de reação para
concentrações mínimas (1 mM) e extremas (140 mM) de lactose. Valores abaixo de 1mg/ml foram
apropriados para a reação linear entre velocidade e concentração inicial de enzima.

Resumo Inglês:

The production permeabilized cell mass of
Kluyveromyces lactis containing the enzyme bgalactosidase
and her catalytic activity in the lactose hydrolysis was accomplished. For obtaining
of the permeabilized cell mass, cells were produced,
growing in serum of UF sterile milk. To promote
the permeabilization of the membrane, cells were
treated with ethanol solution 50% to facilitate the
contact between the enzyme and the substratum in
the process lactose hydrolysis. The catalytic
activity of the enzyme in the lactose hydrolysis
was obtained by the lineal relationship between
the reaction speed and dry weight in mg of
permeabilized cell. The mass of 1mg of permeabilized
cells was equal to 0.32 units of enzyme
activity. The effect of the suspension of
permeabilized cell in the initial speed of reaction
was studied using different lactose concentrations
(1, 40, 100 and 140 mM) and suspensions of
permeabilized cells that varied from 0.1 to 3 mg/
ml.The reactions were accompanied in the
spectrophotometer DU in 510nm, that it supplied
a curve of the absorbance variation with the time
of reaction. The inclination of the straight line
presented by each curve corresponded the initial
speeds for each concentration of permeabilized
cell and lactose. It was used in that analysis a reagent
colorimeter GOP-PAP that specifically reacted with
the present glucose in the middle. For conversion
of the absorvance reading in units of mM glucose,
it was made a curve standard of glucose. The
suspension of 1mg/ml of permeabilized cell added
to the reaction mixture, it was selected by her
lineal relationship with the reaction speed for
minimum concentrations (1mM) and extreme (140
mM) of lactose. Values below 1mg/ml were
appropriate for the lineal reaction between speed
and initial concentration of enzyme.