Identificação de três espécies de Candida por PCR em tempo real

Ano: 2016 | Volume: 6 | Número: 1

Autores: A. Koehler, D. R. Dallemole, L. B. Riça, V. A. Corbellini, A. Rieger

Palavras-chave: candida spp, PCR em tempo real, análise in silico

Resumo Português:

Infecções causadas por leveduras do gênero Candida são muito prevalentes. A correta identificação da espécie é uma etapa fundamental para a escolha do tratamento adequado, mas os métodos tradicionais apresentam limitações. Assim, o objetivo do presente trabalho foi padronizar uma reação de PCR em tempo real (qPCR) para identificação de Candida albicans, C. glabrata e C. parapsilosis, que é uma técnica mais rápida para o diagnóstico. As amostras utilizadas consistiram em DNA extraído de cepas padrão. Realizou-se uma qPCR com SybrGreen® e diluições seriadas das amostras, com as mesmas condições do trabalho em que foram descritos os primers utilizados. Nesse ensaio os resultados foram satisfatórios apenas para C. parapsilosis, pois em C. albicans e C. glabrata, apesar de ocorrer a amplificação da sequência alvo, houve formação de produtos inespecíficos nas reações. Foi feita então uma análise in silico dos primers, que sugeriu não haver problemas significativos em sua construção, contudo encontrou-se alguns problemas de especificidade para C. parapsilosis e C. glabrata. Conclui-se que são necessários estudos posteriores para desenvolvimento e validação de novos primers que mostrem maior sensibilidade e especificidade para as espécies patogênicas.

Resumo Inglês:

Infections caused by yeasts of the genus Candida are very prevalent. The proper identification of the species is a crucial step in choosing therapy, but the traditional methods have limitations. Therefore, the aim of this study was to standardize a real-time PCR (qPCR) assay for the identification of Candida albicans, C. glabrata and C. parapsilosis, being this a rapid technique for the diagnosis. The samples consisted of extracted DNA from standard strains. We performed a qPCR using SybrGreen® and serial diluted samples and under the same conditions of the study in which the primers were described. In this assay, the results were satisfactory only for C. parapsilosis, because for C. albicans and C. glabrata despite it have occurred the amplification of the target sequence, unspecific products formed in the reactions. An in silico analysis indicated that there were no significant problems with the constructed primers, however it was found some specificity issues for C. parapsilosis and C. glabrata. We concluded that further studies are necessary for the development and validation of new primers with higher sensibility and specificity to the pathogenic species.