CINÉTICA DE INIBIÇÃO POR GALACTOSE E GLICOSE NA HIDRÓLISE DE LACTOSE POR β-GALACTOSIDASE EM MASSA DE CÉLULAS PERMEABILIZADAS DE KLUYVEROMYCES LACTIS

Ano: 2008 | Volume: 63 | Número: 365

Palavras-chave: Cinética de inibição; galactose; hidrólise de lactose

Resumo Português:

O efeito de diferentes concentrações de galactose, glicose e de mistura de galactose e
glicose na cinética de hidrólise de lactose por b-galactosidase utilizando células permeabilizadas
de Kluyveromyces lactis como biocatalisador foi realizado. Os experimentos foram realizados
em temperatura ambiente (25oC), utilizando uma suspensão de 1mg/ml de células
permeabilizadas em tampão fosfato na mistura de reação. Para o efeito de galactose na
atividade da enzima, foram combinadas diferentes concentrações de lactose (0, 1, 5, 10, 20,
30 e 40 mM) com diferentes concentrações de galactose (0, 1, 5, 10, 20, 30 e 40 mM). A
reação foi acompanhada em espectofototrômetro DU em 510 nm pela medida de glicose
liberada. As unidades de absorvâncias foram transformadas em mM de glicose, através de uma
curva de calibração apropriada. Durante os estudos do efeito de galactose sobre a atividade da
b-galactosidase, foi utilizado um programa estatístico de computador que auxiliou no cálculo
dos coeficientes cinéticos (Vmáx, Km e Ki) de forma precisa e correta e também ajudou na
escolha e definição de um modelo matemático mecanístico aplicável no entendimento do
processo de hidrólise de lactose levando em consideração a forma de inibição causado pela
presença de galactose. O tipo de inibição competitiva ou não-competitiva foi definido pelo
menor valor apresentado pela soma de quadrados do resíduo pelo programa SAS-NILN. Os
coeficientes cinéticos Vmáx, Km e Ki também estimadas pelo mesmo programa , corresponderam
respectivamente a 0,291 + 0,01mM/min; 2,536 + 0,412 mM e 10,88 + 8,86 mM no intervalo
de confiança de 95%. O tipo de inibição causado pela presença de galactose foi competitiva
para b-galactosidase de Kluyveromyces lactis.

Resumo Inglês:

The effect of different galactose concentrations,
glucose and of galactose mixture and glucose
in the kinetics of lactose hydrolysis for bgalactosidase
using permeabilized cell mass of
Kluyveromyces lactis as biocatalisador was accomplished.
The experiments were accomplished in
room temperature (25oC), using a suspension of
1mg/ml of permeabilized cell mass in phosphate
buffer in the reaction mixture. For the galactose
effect in the activity of the enzyme, they were
different combined lactose concentrations (0, 1, 5,10, 20, 30 and 40 mM) with different galactose
concentrations (0, 1, 5, 10, 20, 30 and 40 mM).The
reaction was accompanied in spectrophotometer
DU in 510 nm for the measure of liberated
glucose.The units of absorvance were transformed
in glucose (mM), through a curve of appropriate
calibration. During the studies of the galactose effect
about the activity of the b-galactosidase, was used a
statistical program of computer that aided in the
calculation of the kinetic coefficients (Vmáx, Km and
Ki) in a necessary and correct way and it also helped
in the choice and definition of a model mechanistical
mathematical applicable in the understanding of the
process of lactose hydrolysis taking into
consideration the inhibition form caused by the
galactose presence.The inhibition competitive or
no-competitive was defined by the smallest value
presented by the residual sum of squares using the
Marquardt iterative method of non-linear regression
(NLIN) program of the statistical analysis system
(SAS). The kinetic coefficients Vmáx., Km and Ki also
dear for the same program, corresponded
respectively to 0.291 + 0.01mM/min; 2.536 + 0.412
mM and 10.88 + 8.86 mM in the interval of trust of
95%. The inhibition type caused by the galactose
presence was competitive for b-galactosidase of
Kluyveromyces lactis.