RT-PCR para detecção do vírus parainfluenza bovino tipo 3 (bPIV-3)

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Início Publicação: 31/12/1969
Periodicidade: Diário
Área de Estudo: Medicina Veterinária

RT-PCR para detecção do vírus parainfluenza bovino tipo 3 (bPIV-3)

Ano: 2008 | Volume: 36 | Número: 3
Autores: Rodrigo de Almeida Vaucher, Amauri Braga Simonetti, Paulo Michel Roehe
Autor Correspondente: Amauri Braga Simonetti | [email protected]

Palavras-chave: bovine parainfluenza type 3 virus, bpiv-3, rt-pcr, hemagglutinin-neuraminidase (hn) gene, detection

Resumos Cadastrados

Resumo Português:

A técnica de RT-PCR tem sido freqüentemente utilizada para a detecção do vírus parainfluenza humano tipo 3 (hPIV-
3), mas a literatura é escassa em relação ao vírus parainfluenza bovino tipo 3 (bPIV-3) .O objetivo deste trabalho foi descrever uma
técnica de reação em cadeia pela polimerase, precedida de transcrição reversa (RT-PCR), para a detecção do vírus parainfluenza
bovino tipo 3 (bPIV-3), usando oligonucleotídeos degenerados para uma região conservada do gene da hemaglutininaneuraminidase
(HN). A amostra-referência SF-4 e três diferentes isolados brasileiros de bPIV-3, além de cinco amostras virais de
diferentes origens, foram incluídos neste estudo. Os vírus foram cultivados em células MDBK sob condições padronizadas. O
teste de hemaglutinação (HA) foi utilizado para a titulação viral, e o teste de imunofluorescência direta (DFTA) para a triagem dos
isolados. Na RT-PCR, todos os isolados de bPIV-3 mostraram amplificação de um fragmento esperado de 1009 pb do gene HN,
ao contrário do que aconteceu com as amostras virais não bPIV-3, onde não foi detectada amplificação. Empregando a amostra
SF-4 como controle positivo, foi obtida uma sensibilidade de 95 pg de cDNA. Apesar do pequeno número de amostras de bPIV-
3 testadas, os resultados obtidos neste estudo apontam para o uso potencial desta técnica na detecção de bPIV-3 em amostras
clínicas bovinas.



Resumo Inglês:

The RT-PCR technique has been frequentely used for detection of the human parainfluenza virus type 3 (hPIV-3)
but the literature is scarce in relation to the bovine parainfluenza virus type 3 (bPIV-3). The aim of this study was to describe
a reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) for detection of bovine parainfluenza virus type 3 (bPIV-3) using
degenerate oligonucleotides targeting a conserved region of hemagglutinin-neuraminidase (HN) gene. Reference strain SF-4
and three different brazilian bPIV-3 isolates, besides five viral strains from different sources, were included in this study. Viruses
were cultured in MDBK cells under standard conditions. Hemagglutination (HA) test was used for viral titration and a direct
immunofluorescence test (DFAT) for isolate screening. In RT-PCR all bPIV-3 isolates showed amplification of an expected
1009 bp fragment of HN gene, as oposed to non PIV-3 viral samples where no amplification was detected. Using SF-4 as
positive control, sensitivity of 95 pg cDNA wasachieved. In spite of the low number of bPIV-3 isolates tested, the results
obtained in this study point out the potential use of this technique for detection of bPIV-3 in bovine clinical specimens.