Jacaratia corumbensis O. Kuntze a New Vegetable Source for Milk-Clotting Enzymes

Ano: 2009 | Volume: 52 | Número: 1

Autores: Ana Rodrigues Duarte, Débora Maria Rodrigues Duarte, Keila Aparecida Moreira, Maria Taciana Holanda Cavalcanti, José Luiz de Lima-Filho, Ana Lúcia Figueiredo Porto

Palavras-chave: jacaratia corumbensis o kuntze, milk clotting enzyme, characterization, purification, vegetable enzyme

Resumo Português:

A enzima coagulante de leite obtida de látex de
raiz de Jacaratia corumbensis O. kuntze foi
caracterizada parcialmente e purificada, por
precipitação fracionária com sulfato de amônio e
cromatografia de troca de íon. Foram utilizadas
cinco frações de sulfato de amônio (AS1 - 0-20%;
AS2 - 20-40%; AS3 - 40-60%; AS4 - 60-80%;
AS5 - 80-100%), a fração 40-60% (AS3) mostrou
alta atividade coagulante com um fator de
purificação de 1,2 vezes em relação ao extrato
bruto. Esta fração foi aplicada em coluna Mono Q
obtendo dois picos de proteína (p1 e p2), o p1
mostrou melhor atividade coagulante. O pH ótimo
para o extrato bruto e parcialmente purificado foi
6,5 e 7,0, respectivamente. A atividade coagulante
foi atingida a 55ºC para ambos os extratos, bruto e
parcialmente purificado. A enzima foi inibida por
ácido iodoacético que sugere que esta enzima é
uma cisteína protease, com peso molecular de 33
kDa.

Resumo Inglês:

The partial characterization and purification of milk clotting enzyme obtained from the (root latex) of Jacaratia
corumbensis O. kuntze was studied, by fractional precipitation with ammonium sulphate and ion exchange
chromatography. The ammonium sulphate precipitate showed five fractions (AS1– 0-20%; AS2 – 20-40%; AS3 – 40-
60%; AS4 – 60-80%; AS5 – 80-100%) and among the fractions obtained, the 40-60% fraction (AS3) showed the
highest milk clotting activity with a purification factor of 1.2 fold in relation to the crude extract. This fraction when
applied on Mono Q column yielded two protein peaks (p1 and p2), but p1 pool showed the best milk-clotting activity.
The optimal pH for the crude and partially purified extract was 6.5 and 7.0, respectively. The maximum milk-clotting
activity was at 55ºC for the both crude and partially purified extracts. The enzyme was inhibited by iodoacetic acid
which suggested that this enzyme was a cysteine protease, with molecular weight of 33 kDa.