O Temephos, durante muito tempo, foi o único larvicida disponÃvel para o controle do Aedes aegypti. O larvicida diflubenzuron (DFB) destaca-se como um substituto do temephos. Objetivou-se avaliar o efeito do DFB sobre larvas de duas populações de Aedes aegypti sendo elas de Vila Velha – ES (VVE) e Santarém – PA (STR) com distintos nÃveis de suscetibilidade ao temephos e investigar as potenciais anormalidades morfológicas provocadas nos indivÃduos. Os bioensaios foram realizados com o larvicida DFB, com larvas das duas populações resistentes ao Temephos e com a cepa Rockeffeller, utilizada como padrão de suscetibilidade para se obterem os valores de razão de resistência. Nos bioensaios com o DFB, os números de larvas, pupas e adultos foram registrados durante dez dias. O DFB causa 95% de redução na emergência de adultos da cepa Rockefeller na concentração de 2,88 µg.L-1, de 3,11 µg.L-1 na população VVE (RR95 = 1,07) e 3,30 µg.L-1 na população STR (RR95 = 1,15), além de provocar anormalidades morfológicas nos diferentes estágios de desenvolvimento. O DFB, com concentrações acima de 3,0 µg.L-1, é efetivo para a VVE e para a STR, que apresentam resistência intermediária e baixa ao Temephos, respectivamente. Nesta concentração, o DFB causa a inibição total da emergência de adultos viáveis nestas populações.