AVALIAÇÃO DA CITOTOXICIDADE DO PEPTÍDEO ANTIMICROBIANO P34

Ano: 2013 | Volume: 1 | Número: 1

Autores: M. H. V. FERNANDES, D. S. SILVA, C. C. CASTRO, A. R. CORRÊA, G. D. VARGAS, G. FISCHER, A. S. MOTTA, S. O. HÜBNER.

Palavras-chave: peptídeo antimicrobiano, citotoxicidade, linhagem celular.

Resumo Português:

O peptídeo antimicrobiano identificado como P34 foi obtido a partir de uma nova espécie de Bacillus isolada do conteúdo intestinal do peixe Piau-com-pinta (Leporinus sp.), presente na região da Bacia Amazônica. A atividade do P34 já foi demonstrada in vitro contra Listeria monocytogenes e herpesvírus bovino. Entretanto, para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos é essencial, inicialmente, uma avaliação dos seus níveis de toxicidade. O presente trabalho relata a avaliação da citotoxicidade do peptídeo P34 in vitro, usando o ensaio de vermelho neutro como método de determinação da viabilidade celular. Células CRFK (Crandell rees feline kidney), RK13 (Rabbit kidney), VERO (African green monkey kidney), MDCK (Madin-Darby canine kidney) e MDBK (Madin-Darby bovine kidney) foram cultivadas durante 24 horas e posteriormente expostas ao antimicrobiano P34, em diferentes concentrações, por 48 horas. A análise pelo ensaio de vermelho neutro demonstrou diferentes níveis de toxicidade, variando de acordo com a linhagem celular avaliada. As linhagens que permitiram uma concentração mais elevada do peptídeo P34 foram a RK13, MDBK e MDCK, com concentrações de 1,15µg.ml-1, 1,07 µg.ml-1 e 1,0 µg.ml-1. Já as linhagens VERO e CRFK toleraram uma menor concentração do peptídeo para não apresentarem efeito citotóxico, sendo as concentrações de 0,75 µg.ml-1 e 0,5 µg.ml-1, respectivamente.

Resumo Inglês:

A new antimicrobial peptide identified as P34 was obtained from a new Bacillus species isolated from the intestinal contents of the fish Piau-com-pinta (Leporinus sp.) in the region of the Amazon basin. The P34 peptide demonstrated activity against Listeria monocytogenes and bovine herpesvirus in vitro. However, it is essential for the development of new therapeutic agents an evaluation of its levels of toxicity in vitro. This paper describes the assessment of cytotoxicity of P34 peptide in vitro using the neutral red assay as a method for determination of cell viability. CRFK (Crandell rees feline kidney), RK13 (Rabbit kidney), VERO (African green monkey kidney), MDCK (Madin-Darby canine kidney) and MDBK (Madin-Darby bovine kidney) cells were cultured for 24 hours and exposed to the antimicrobial P34 in different concentrations for 48 hours. The analysis by neutral red assay showed different levels of toxicity depending on the cell lineage. The cell lines which tolerate a higher concentration of P34 peptide were RK13, MDBK and MDCK, with concentrations of 1.15 µg.ml-1, 1.07 µg.ml-1 and 1.0 µg.ml-1. On the other hand, concentrations of 0.75 μg.ml-1 and 0.5 μg.ml-1 had no cytotoxic effect in the CRFK and VERO respectively.

Resumo Espanhol:

Un nuevo péptido antimicrobiano identificado como P34 se obtuvo de una nueva especie de Bacillus aislado del contenido intestinal del pez Piau-com-pinta (Leporinus sp.), presente en la región de la cuenca del Amazonas. El péptido P34 mostró actividad in vitro contra Listeria monocytogenes y el herpesvirus bovino. Para el desarrollo de nuevos agentes terapéuticos es esencial la evaluación de sus niveles de toxicidad. Este trabajo describe la evaluación de la citotoxicidad del péptido P34 in vitro utilizando el ensayo de captación del rojo neutro como un método para determinar la viabilidad celular. Las células CRFK (Crandell rees feline kidney), RK13 (Rabbit kidney), VERO (African green monkey kidney), MDCK (Madin-Darby canine kidney) y MDBK (Madin-Darby bovine kidney) se cultivaron durante 24 horas y se expusieron a la P34 antimicrobiano en diferentes concentraciones, durante 48 horas. El análisis por ensayo de rojo neutro mostró distintos niveles de toxicidad, evaluado según la célula. Las líneas celulares que permitieron una mayor concentración de péptido P34 eran RK13, MDBK y MDCK, con concentraciones de 1,15 μg.ml-1, 1,07 μg.ml-1 y 1,0 μg.ml-1. Las cepas CRFK y VERO permitieron una menor concentración del péptido, no hubo efecto citotóxico a concentraciones de 0,75 μg.ml-1 y 0,5 μg.ml-1, respectivamente.