Search for Alkaloids on Callus Culture of Passiflora alata

Ano: 2010 | Volume: 53 | Número: 4

Autores: Michelli Wesz Machado, Carlos Stern Neto, Juliana Salgado, Gilmar Zaffari, Andersson Barison, Francinete Ramos Campos, Yuri Eberlim de Corilo, Marcos Nogueira Eberlin, Maique Weber Biavatti

Palavras-chave: passiflora alata, b-carboline alkaloids, pyrazoles, callus culture

Resumo Português:

As folhas de varias espécies de Passiflora são
utilizadas como ansioliticas e sedativas. Passiflora
alata Curtis, Passifloraceae consta em três edições
da farmacopéia brasileira, porem não há muitos
estudos sobre sua composição química. No
passado, enfatizava-se a ação conjunta de
alcalóides e flavonóides. Em trabalho anterior, não
foi detectada a presença de alcalóides harmanicos
através de CLAE. Assim, decidiu-se investigar a
produção dos mesmos através de cultivo celular,
introduzindo seu precursor metabólico Ltriptofano.
Os explantes foliares apresentaram resultados
satisfatorios para germinação apos assepsia, e a
formação de calo foi iniciada em meio MS com
quantidades adequadas de fitohormonios,
previamente determinadas. Sessenta dias após a
inoculação os calos foram repicados para meio
semi-solido com e sem L-triptofano (50, 100, 200
mg/L), mantidos por 90 dias em condições padrão.
Amostras foram coletadas com 6, 16, 26, 36, e 90
dias, realizada extração acido-base e o extrato
analisado por CLAE. Os resultados mostraram a
ausência de harmana, harmina, harmol, harmalol e
harmalina. Dois picos presentes nas amostras com
L-triptofano foram coletados e analisados através
de espectrometria de massas, electrospray modo
positiva [ESI(+)-MS] e analise em tandem ESI(+)-
MS/MS. Os espectros correspondentes foram
similares, mostrando a perda consecutiva de 68
Da, atribuídos ao pirazol. Este fato aponta para
uma transformação não enzimática, não
relacionada a uma biossintese previamente descrita
para alcalóides β-carbolínicos.

Resumo Inglês:

Preliminary work on Passiflora alata leaves failed to detect harmane alkaloids using LC. The aim of this work was to
investigate the production of harmane alkaloids through the cell culture of P. alata, inducing its precursor (Ltryptophan).
The leaf explants presented satisfactory results after disinfection, and the callus formation was initiated
in MS media with adequate quantities of phytohormones. Sixty days after inoculation, calli were inoculated in the
optimized semi-solid MS media, with and without the addition of L-tryptophan (50, 100, 200 mg/L) and kept in
standard conditions for 90 days. Calli were collected on days 6, 16, 26, 36, and 90, followed by acid-base
extraction, and analysed by LC. The results showed an absence of harmane, harmin, harmol, harmalol, and
harmaline. With L-tryptophan feeding, two peaks were detected, collected and analysed through positive mode
electrospray [ESI(+)-MS] and sequential analysis in tandem ESI(+)-MS/MS. The spectra obtained were very
similar, with a repetition of the more intense ions, and consecutive loss of 68 Da units, attributed to the heterocycle
pyrazole. It appeared that this transformation was not related to any enzymatic pathway previously described for
the plant from L-tryptophan, and the biosynthesis of β-carboline alkaloids in callus culture of P. alata were not
observed in this work.