Padronização das técnicas de PCR convencional e PCR em tempo real para diagnóstico de Candida albicans

Ano: 2013 | Volume: 3 | Número: 1

Autores: B. S. Lutz, G. K. Silva, V. A. Corbelini, J. D. P. Renner, L. G. Possuelo, A. R. M. Valim

Palavras-chave: candida albicans, diagnóstico, PCR convencional, RT-PCR

Resumo Português:

Candida albicans é a espécie mais frequente em micoses hospitalares. O difícil diagnóstico relacionado com a baixa sensibilidade e o tempo longo para apresentação dos resultados são os principais fatores relacionados às recidivas e dificuldades na terapia. O objetivo desse estudo foi padronizar técnicas de PCR convencional e em tempo real (RT-PCR) e determinar a sensibilidade e especificidade na detecção de C. albicans. As extrações de DNA foram realizadas utilizando método in house. Os primers utilizados foram baseados na região NTS para a PCR convencional e na região espaçadora interna transcrita (ITS2) do gene de rRNA de C. albicans para a RT-PCR. A PCR convencional apresentou sensibilidade de 100 pg e baixa especificidade, sendo positiva também para a cepa de S. cerevisiae. A sensibilidade da RT-PCR foi de 0,1 fg e especificidade questionável. As duas técnicas tiveram tempo de execução menor em relação ao padrão-ouro. Concluímos que a PCR convencional apresentou limitações e a RT-PCR foi mais sensível na detecção de C. albicans. As técnicas devem ser aperfeiçoadas para testes com amostras clínicas, mas apresentam grande potencial no diagnóstico de C. albicans, visto que a sensibilidade, especificidade e tempo de execução se apresentam superiores à técnica padrão-ouro.

Resumo Inglês:

Candida albicans is the most frequent species in nosocomial mycosis. The hard diagnosis related to law sensitivity and the long time to obtain results are the main factors to cause recurrence and difficulties in therapy. This study aimed to develop conventional and real time PCR (RT-PCR) techniques and determine the sensitivity and specificity for C. albicans detection. The DNA extractions were performed with an in house method. The primers used were specific for the NTS region using the conventional PCR and for the internal transcribed spacer (ITS2) region of the C. albicans rRNA gene using RT-PCR. The conventional PCR showed sensitivity of 100 pg and low specificity, being positive also for the S. cerevisiae strain. The RT-PCR had the sensitivity of 0.1 fg and questionable specificity. Both techniques were less time consuming than the current gold-standard diagnosis. We conclude that the conventional PCR presented limitations and the RT-PCR technique was more sensitive for C. albicans detection. The techniques should be improved for tests with clinical samples, but have great potential in C. albicans diagnosis, since the sensitivity, specificity and runtime are already above the gold-standard technique.